新聞動態
聯系我們

地 址:哈爾濱市道外區濱江鳳凰城408棟1號商服

電 話:0451-85901717

手機:13945090436 13704519693

18644011888 18604600209

聯系人:王先生

新聞動態
當前位置:幸运彩票登入/新聞動態/新聞動態
流式細胞儀的基本結構
發布時間:2018-05-25

  流式細胞計的基本結構流式細胞計主要由四部分組成。它們是:流動室和液流系統;激光源和光學系統;光電管和檢測系統;計算機和分析系統。

  (1)流動室和液流系統:流動室由樣品管幸运彩票登入、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學玻璃、石英等透明幸运彩票登入、穩定的材料制作幸运彩票登入。設計和制作均很精細幸运彩票登入,是液流系統的心臟。樣品管貯放樣品幸运彩票登入,單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔,包圍在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液流是穩液,一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。流動室上裝有壓電晶體,受到振蕩信號可發生振動。

  (2)激光源和光學系統:經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發才能發出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光;激光器又以氬離子激光器為普遍,也有配和氪離子激光器或染料激光器。光源的選擇主要根據被激發物質的激發光譜而定。汞燈是最常用的弧光燈,其發射光譜大部分集中于300~400nm幸运彩票登入,很適合需要用紫外光激發的場合。氬離子激光器的發射光譜中幸运彩票登入,綠光514nm和藍光488nm的譜線最強幸运彩票登入,約占總光強的80%;氪離子激光器光譜多集中在可見光部分,以647nm較強。免疫學上使用的一些熒光染料激發光波長在550nm以上,可使用染料激光器。將有機染料做為激光器泵浦的一種成份,可使原激光器的光譜發生改變以適應需要即構成染料激光器。例如用氬離子激光器的綠光泵浦含有Rhodamine 6G水溶液的染料激光器,則可得到550~650nm連續可調的激光,尤在590nm處轉換效率,約可占到一半。為使細胞得到均勻照射,并提高分辨率幸运彩票登入,照射到細胞上的激光光斑直徑應和細胞直徑相近。因此需將激光光束經透鏡會聚幸运彩票登入。光斑直徑d可由下式確定:d=4λf/πD。λ為激光波長;f為透鏡焦距;D為激光束直徑。色散棱鏡用來選擇激光的波長,調整反射鏡的角度使調諧到所需要的波長λ。為了進一步使檢測的發射熒光更強幸运彩票登入,并提高熒光訊號的信噪比幸运彩票登入,在光路中還使用了多種濾片。帶阻或帶通濾片是有選擇性地使某一濾長區段的光線濾除或通過幸运彩票登入。例如使用525nm帶通濾片只允許FITC(Fluoresceinisothiocyanate,異硫氰熒光素)發射的525nm綠光通過。長波通過二向反射鏡只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的另一特定波長的光線反射。在免疫分析中常要同時探測兩種以上的波長的熒光信號幸运彩票登入,就采用二向反射鏡幸运彩票登入,或二向分光器,來有效地將各種熒光分開。

  (3)光電管和檢測系統:經熒光染色的細胞受合適的光激發后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應時間短幸运彩票登入,僅為ns數量級;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區,光量子產額都比較高。光電倍增管的增益從103到108可連續調節 ,因此對弱光測量十分有利。光電管運行時特別要注意穩定性問題幸运彩票登入,工作電壓要十分穩定,工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應處理幸运彩票登入,并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT,因為光譜響應特性不同,不宜互換。也有用硅光電二極管的,它在強光下穩定性比PMT好。

  從PMT輸出的電信號仍然較弱幸运彩票登入,需要經過放大后才能輸入分析儀器。流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關系,稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內變化的信號以及代表生物學線性過程的信號,例DNA測量等。另一類是對數放大器,輸出信號和輸入信號之間成常用對數關系。在免疫學測量中常使用對數放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性幸运彩票登入、陽性和強陽性三個亞群幸运彩票登入,它們的熒光強度相差1~2個數量級;而且在多色免疫熒光測量中,用對數放大器采集數據易于解釋。此外還有調節 便利、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優點幸运彩票登入。

  (4)計算機和分析系統:經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數是和電信號的脈沖高度相對應的幸运彩票登入,也是和光信號的強弱相關的。對應道數年縱坐標通常代表發出該信號的細胞相對數目。多道分析器出來的信號再經模-數轉換器輸往微機處理器編成數據文件,或存貯于計算機的硬盤和軟盤上幸运彩票登入,或存于儀器內以備調用。計算機的存貯容量較大幸运彩票登入,可存貯同一細胞的6~8個參數。存貯于計算機內的數據可以在實測后脫機重現,進行數據處理和分析,最后給出結果。除上述四個主要部分外,還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。

幸运彩票登入